美國普林斯頓大學(xué)Britt Adamson、加州大學(xué)舊金山分校Jonathan S. Weissman等研究人員合作取得一項新成果。他們開發(fā)出直接向?qū)NA（sgRNA）捕獲和靶向測序的組合式單細胞CRISPR篩選技術(shù)。2020年3月30日，《自然生物技術(shù)》在線發(fā)表了這一成果。

　　研究人員報道了直接捕獲Perturb-seq，這是一種通用的篩選方法，其中表達的sgRNA與單細胞轉(zhuǎn)錄組一起測序。直接捕獲Perturb-seq可檢測單個細胞中多個不同的sgRNA序列，因此可將合并的單細胞CRISPR篩選輕松與包含雙向?qū)П磉_載體的組合擾動文庫配對。

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　　研究人員證明了這種方法對遺傳相互作用高通量研究的實用性，并利用這種能力，剖析了膽固醇生物發(fā)生與DNA修復(fù)之間的上位相互作用。使用直接捕獲Perturb-seq，研究人員還發(fā)現(xiàn)，針對每個細胞具有多個sgRNA的單個基因，這一技術(shù)可以提高CRISPR干擾和激活的效率，從而有助于將緊湊、高效的CRISPR庫用于單細胞篩選。

　　最后，研究人員證明了基于雜交的靶標(biāo)富集能夠?qū)碜詥渭毎鸕NA-seq實驗的有用轉(zhuǎn)錄本進行靈敏、特異的測序。

　　據(jù)了解，單細胞CRISPR篩選可以探索哺乳動物的基因功能和遺傳調(diào)控網(wǎng)絡(luò)。但是，由于依賴于單個sgRNA的間接索引，該技術(shù)的使用受到了限制。

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